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PKG,小鼠蛋白激酶GELISA试剂盒说明书

PKG,小鼠蛋白激酶GELISA试剂盒说明书

简要描述:PKG,小鼠蛋白激酶GELISA试剂盒说明书用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中小鼠蛋白激酶G(PKG)的含量。

产品型号:

所属分类:小鼠ELISA试剂盒

更新时间:2021-03-01

详细说明:

产品名称:PKG,小鼠蛋白激酶GELISA试剂盒说明书

产品规格: 48T/96T

产品产地: 美国

品牌商标: RD/TSZ/BIM

价    格:(具体优惠价格请咨询业务员)

适用物种:大鼠,小鼠,人,等其他动物

供货数量:  150

zui小起订: 1盒

应用范围: 科研Elisa检测

供货所在地:上海

发货期限:至买家付款后1-2天发货,部分期货需要货期4周

使用范围:科研使用,不能应用于临床

组成(2-8℃保存)

酶标板(Coated Wells)

96孔

酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate)

12ml

10×标本稀释液(Sample Buffer)

12ml

20×浓缩洗涤液(Wash Buffer)

50ml

标准品(Standards):8ng/瓶

2瓶

底物工作液(TMB Solution)

12ml

*抗体工作液(Biotinylated Antibody)

12ml

终止液(Stop Solution)

12ml

准备试剂与收集血样

1.          收集标本:血清、血浆(EDTA)、细胞培养上清液、组织匀浆等裂解产物尽早检测,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20 ℃或-70 ℃)保存,避免反复冻融。

2.          标准品液配制:使用前加入0.5ml蒸馏水混匀,配成16000pg/ml的溶液。设标准管8管,每管加入标本稀释液200ul。在*管中加入16000pg/ml的标准品溶液200ul混匀后用加样器吸出200ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第七管中吸出200ul弃去。第八管为空白对照。

3.          10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。

4.         洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)

标本激活方法

 1.   将450ul标本稀释液加入到一支1.5ml进口聚丙烯管中,再加10ul血清或血浆标本。

 2.   加20ul 1 N HCI,盖紧,上下混匀。2-8℃放置60± 2分钟。

 3.   加20ul 1 N NaOH,盖紧,上下混匀。

 4.   即用,或放-20/-70℃保存3天。计算结果时乘以稀释倍数50。(注意:不同的标本HSP60的水平可能有较大差异,请根据实际情况灵活掌握稀释度)

 5.   细胞培养上清或组织匀浆10倍稀释(410ul的标本稀释液+50ul样本+20ul的1N HCI+20ul的1N NaOH)。

改良双抗体夹心法

本法是双抗体夹心法的一种改良形式,也是用于测定抗原的,其原理可用图来表示。本法首先是将特异性抗体a包被于固相载体,经洗涤加入含有欲测抗原之待检样品。经孵育洗涤后再加一次未标记的特异性抗体b,而这次加入的抗体b于*次包被于固相载体上的特异性抗体a对被测抗原来说都是特异性的,但不是用同种动物免疫制备的,否则可出现非特异性反应。经孵育洗涤后,再加酶标记抗b抗体,再经孵育洗涤后加底物显色进行测定。这种方法与双抗体夹心法不同之处是多加了一层抗体。因此,放大的倍数更高,故比双抗体夹心法更加灵敏。同时避免标记特异性抗体,而另一优点是只要标记一种抗抗体,即可达到多种应用。

产品检测程序

1.        加样:每孔各加入标准品或待测样品(已激活)100ul,将反应板充分混匀后置37℃120分钟。

2.          洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。

3.          每孔中加入*抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。

4.          洗板:同前。

5.          每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。

6.          洗板:同前。

7.          每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗处反应15分钟。

8.          每孔加入100ul终止液混匀。

9.          30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

结果计算与判断

1.          所有OD值都应减除空白值后再行计算。

2.          以标准品8000、4000、2000、1000、500、250、125、0 pg/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。

3.          根据样品OD值在该曲线图上查出相应HSP60含量,再乘上稀释倍数即可。

试剂盒性能

1.   灵敏度:zui小的HSP60 检测浓度小于65pg/ml。

2.    特异性:可同时检测重组或天然的人HSP60。不与人其它细胞因子有交叉反应。

3.     重复性:板内、板见变异系数均小于12%。

注意事项

  1.   以上标准孔及待测样品均建议做复孔,每次测定应同时做标准曲线。

 2.   洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。

 3.   板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥。

 4.   本试剂盒宜置4oC冰箱保存。

 5.   本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!



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