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B7-H6,人B7同系物6AELISA试剂盒
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人B7同系物6(B7-H6)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人B7同系物6(B7-H6)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
标本收集
1. 本试剂盒可使用血清、血浆、细胞培养上清液、组织液标本。
2. 室温(20-25℃)下保存标本不要超过8小时。2-10℃保存标本,不超过48小时。如
耽搁的时间更长,请在-20℃或更低的温度下保存标本。标本避免多次冻融,这样可能会损失蛋白活性,产生错误结果。
准备工作
1. 浓缩洗涤液(20X)用双蒸水稀释成1X(至 500ml)。
操作步骤
试剂盒应平衡至室温(20-25°C )再试验。 取出所需反应板。
1. 加入10ul标准品(Standards)、10ul标本于相应反应板孔中。
2. 每孔加入40ul Anti mouse IL-1 Biotin 和40ul Anti mouse IL-1 POD。轻轻混匀30秒,封
住板孔,室温温育 45分钟。
3. 洗板:甩尽板内液体,用洗涤液洗涤反应板(每孔内加入350ul洗涤液),并去除水滴
(在厚叠吸水纸上拍干);反复洗涤5次。
4. 每孔加入100ul显色液, 轻轻混匀10秒,室温温育20分钟。
5. 每孔加入100ul终止液(Stop Solution)。轻轻混匀30秒;30分钟内在450nm处读OD
值。
以OD值为纵坐标,以标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线。根据样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度。