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共享:培养基湿热灭菌操作方法

更新时间:2018-01-31 点击量:1542

    什么是培养基灭菌?为什么要灭菌?给培养基灭菌的方法有很多,如干热灭菌、湿热灭菌等。大多数的培养基灭菌都是使用湿热灭菌法了,今天上海沪鼎与您共享培养基湿热灭菌操作方法。
一、热灭菌的主要原理
    1.微生物的热阻
    2.对数残存定律
    3.理论灭菌时间的计算
    4.灭菌温度的选择

 

二、影响灭菌效果的因素
    1.微生物种类:不同的微生物k值不同。
    2.初始菌量:在保持N值不变的前提下,t与初始菌量N0的对数成正比。
    3.培养基成份:油脂、蛋白质增加微生物的耐热性。
    4.传热与混合状况:影响受热均匀度。
    5.培养基中固体颗粒的存在影响热穿透。
    6.蒸汽中空气的存在降低蒸汽分压和灭菌温度。
    7.pH:酸性pH下可加快微生物热死速率

三、培养基的工业灭菌
    1.实验室种子培养基灭菌方法
    ①高压蒸汽灭菌锅、 手提式灭菌锅。容量小。
    ②立式或卧式灭菌锅,容量较大,一般能装几十瓶或几百瓶。
    ③灭菌柜,要和蒸汽锅炉配套, 用于大量种瓶培养基的灭菌, 一次能装几百至几千瓶(袋)。
    2.培养基的分批灭菌
    ①定义:将配制好的培养基输入发酵罐中,用蒸汽加热,使培养基和设备同时灭菌的一种灭菌方式,又称实罐灭菌。
    ②灭菌过程
    过程包括升温、保温和冷却等三个阶段,各阶段对灭菌的贡献:20%、75%、5%。培养基的升温可由两种方式实现:间接加热,在夹套或蛇管中通入蒸汽加热;直接加热,在培养基中直接通入热蒸汽加热。
    灭菌过程中加热和保温阶段的灭菌作用是主要的,而冷却阶段的灭菌作用是次要的,一般很小,可以忽略不计。此外,还应指出的是,应当避免长时间的加热阶段,因为加热时间过长,不仅破坏营养物质,而且也有可能引起培养液中某些有害物质的,从而影响培养过程的顺利进行。
    在实际生产中,也可能遇到所供蒸汽不足、温度不够高的情况,这时可以适当延长灭菌时间。生产上甚至有用100℃蒸煮而达到*灭菌的实例。如要做固体曲而没有高温蒸汽时,可将原料用100蒸汽蒸30min,杀死其中的营养细胞,但孢子与细菌的芽孢没有被杀死。
    将蒸过的原料置于室温下过夜,未被杀死的孢子便发芽生长,芽孢发育成营养细胞,再30min便可杀死。如此连续反复进行2-3次,亦可达到*灭菌的目的。

    3.分批灭菌的操作
    分批灭歇是在所用的发酵罐或其他培养装置中进行的,它是在配制罐中配好培养基后,通过管道输入发酵罐等培养设备中,然后开始灭菌。在进行培养基的间歇灭菌之前,通常先将发酵罐等培养装置的分空气过滤器进行灭菌,并且用空气将分过滤器吹干。开始灭菌时,应先放去夹套或蛇管中的冷水,开启排气管阀,通过空气管向发酵罐内的培养基通入蒸汽进行加热,同时,也可在夹套内通蒸汽进行间接加热。
    当培养基温度升到70℃左右时,从取样管和放料管向罐内通入蒸汽进一步加热,当温度升至120℃,罐压为1 105Pa(表压)时,打开接种、补料、消泡剂、酸、碱等管道阀门进行排汽,当然在保温过程中,应注意凡在培养基液面下的各种进口管道都应通入蒸汽,而在液面以上的其余各管道则应排放蒸汽,这样才能不留死角,从而保证灭菌*。保温结束后,依次关闭各排汽、进汽阀门,待罐内压力低于空气压力后,向罐内通入无菌空气,在夹套或蛇管中通冷水降温,使培养基的温度降到所需的温度,进行下一步的发酵和培养。
    由于培养基的间歇灭菌不需要专门的灭菌设备,投资少,对设备要求简单,对蒸汽的要求也比较低,且灭菌效果可靠,因此,间歇灭菌是中小型生产工厂经常采用的一种培养基灭菌方法。
 

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